A che cosa serve
Cultura pura = popolazione da una singola cellula ancestrale, tutte cellule geneticamente identiche. Si parte da colonia singola e si replica purificazione 2-3×.
Quando serve
Caratterizzare ceppo specifico, bankare cultura interessante, produrre inoculi standardizzati.
- Precisione
- Purezza verificata da: omogeneità colonie, microscopia (una sola morfologia), test biochimici consistenti.
Che cosa occorre
- Piastre PetriPre-sterilizzate Ø 90-100mm
- Ansa da inoculo
- Becco Bunsen ad alcool
- Microscopio otticoObiettivi 10×, 40×, 100× (immersione)
Come si fa
- Seleziona colonia ben formataQuadranti 3-4: colonia ben separata. Morfologia, colore, bordo, elevazione caratteristici e uniformi.Perché. Scelta della colonia critica. Colonia con satelliti microscopici fa fallire isolamento.
- Re-streak su piastra nuovaAnsa sterile, tocca colonia, streak su agar fresca (4-quadranti). Incuba 24-48h.
- Verifica purezza al microscopioSmear su vetrino, colora con Gram. UNA SOLA morfologia uniforme = pura. Forme diverse = non pura.
- Espandi in brodo per bankingQuando pura, inocula colonia in 10ml brodo sterile (MRS lattici, YPD lieviti). 24-48h fino a torbidità massima — 10^9 CFU/ml, pronto per cryopreservation.
Errori comuni
Saltare il re-streaking
- Che cosa succede
- Cultura non effettivamente pura — contaminanti minori invisibili
- Come si evita
- Sempre 2-3 cicli streaking prima di dichiarare 'pura'
Il perché, in breve
Cellula batterica ha DNA identico a progenie (escluse rare mutazioni). Colonia da singola cellula = clonale. Da colonia clonale → popolazione geneticamente uniforme — base di ogni studio microbiologico serio.
Testo della redazione di Fermentation Lab, lo stesso della Libreria dell'app. Hai trovato un errore? Scrivici: fermentationlabapp@gmail.com